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熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀技術(shù)參數(shù)
熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀技術(shù)參數(shù):
1、可進(jìn)行**的定量檢測。用于基因診斷。2、定量范圍寬。3、特異性更強(qiáng),克服了假陽性。4、操作簡單快速,無須后處理和電泳檢測。5、**,技術(shù)易于學(xué)習(xí),易于進(jìn)行電腦化數(shù)據(jù)管理。
PCR常見問題
一、沒有擴(kuò)增產(chǎn)物 1、循環(huán)溫度:變性溫度、退火溫度 2、引物設(shè)計(jì) 3、DNA聚合酶活性 4、抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合酶活性的成份) 5、DNA樣品
二、非特異產(chǎn)物及電泳呈涂布狀 1、Mg2+濃度 2、調(diào)整引物、模板、聚合酶的用量3、適當(dāng)減少循環(huán)數(shù) 4、適當(dāng)提高退火溫度,縮短退火或延伸時(shí)間?
三、引物二聚體的形成 1、檢查引物的序列 2、提高退火溫度 3、調(diào)整引物與模板濃度4、增加引物長度四、假陽性結(jié)果的預(yù)防 1、實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)一次性使用(吸咀、PCR管) 2、注意操作環(huán)境,戴一次性手套 3、嚴(yán)格PCR操作規(guī)程 4、多次取樣的試劑應(yīng)分裝 5、設(shè)置陰性對照和陽性對照
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