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PCR技術(shù)的定義及其基本原理
PCR技術(shù)的定義及其基本原理,PCR定義 PCR(PolymeraseChainReaction)即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點(diǎn),通過(guò)變性、退火、延伸等步驟,體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù),能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA??捎糜诨蚍蛛x克隆,序列分析,基因表達(dá)調(diào)控,基因多態(tài)性研究等許多方面。
PCR技術(shù)的基本原理一、PCR反應(yīng)成分: 1、模板DNA; 2、引物; 3、四種脫氧核糖核苷酸;4、DNA聚合酶;5、反應(yīng)緩沖液、Mg2+等。二、PCR反應(yīng)基本步驟:1、變性(denaturation):通過(guò)加熱使模板DNA的雙鏈之間的氫鍵斷裂,雙鏈分開(kāi)而成單鏈的過(guò)程,高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈(94℃,30s)。 2、退火(annealling):當(dāng)溫度降低時(shí),引物與模板DNA中互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合成雜交分子,低溫下,引物與模板DNA互補(bǔ)區(qū)結(jié)合(55℃,30s)。 3、延伸(extension):在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下,DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸,合成出與模板DNA鏈互補(bǔ)的DNA子鏈,中溫延伸,DNA聚合酶催化以引物為起始點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)(70~72℃,30~60s) 以上述三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán),每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個(gè)循環(huán)的模板,經(jīng)過(guò)n次循環(huán)后,目的DNA以2n的形式增加。
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