分光光度計是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析。可廣泛應(yīng)用于制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機械、冶金、石油、食品、生物、材料、計量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個方面，下面將為您詳細(xì)介紹分光光度計。

一、分光光度計的分類（按照波長及應(yīng)用領(lǐng)域劃分）

1.紫外分光光度計：測定波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)。

2.可見光分光光度計：測定波長范圍為400～760 nm的可見光區(qū)。

3.紅外分光光度計：測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū)。

4.熒光分光光度計：用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜。

5.原子吸收分光光度計：光源發(fā)出被測的特征光譜輻射，被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測元素基態(tài)原子所吸收，通過測定特征輻射被吸收的大小，來求出被測元素的含量。

二、分光光度計工作原理

分光光度計計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
     

三、分光光度計的基本結(jié)構(gòu)

1.顯示器

顯示器是將光電管或光電倍增管放大的電流通過儀表顯示出來的裝置。常用的顯示器有檢流計、微安表、記錄器和數(shù)字顯示器。檢流計和微安表可顯示透光度（T%）和吸光度（A）。數(shù)字顯示器可顯示T%、A和C（濃度）。

2.檢測器

檢測器是將透過溶液的光信號轉(zhuǎn)換為電信號，并將電信號放大的裝置。常用的檢測器為光電管和光電倍增管。

3.比色杯

比色杯又稱為吸收池或比色皿。比色杯常用無色透明、耐腐蝕和耐酸堿的玻璃或石英材料做成，用于盛放待比色溶液的一種裝置。

4.單色器

將來自光源的復(fù)合光分散為單色光的裝置稱為分光系統(tǒng)或單色器。單色器可分成濾光片、棱鏡和光柵。濾光片能讓某一波長的光透過，而其它波長的光被吸收，濾光片可分成吸收濾光片、截止濾光片、復(fù)合濾光片和干涉濾光片。

5.光源

光源指一種可以發(fā)射出供溶液或吸收物質(zhì)選擇性吸收的光。光源應(yīng)在一定光譜區(qū)域內(nèi)發(fā)射出連續(xù)光譜，并有足夠的強度和良好的穩(wěn)定性，在整個光譜區(qū)域內(nèi)光的強度不應(yīng)隨波長有明顯的變化。實際上許多光源的強度都隨波長變化而變化。為了解決這一問題，在分光光度計內(nèi)裝有光強度補償裝置，使不同波長下的光強度達到一致醫(yī)學(xué)教育。
     

四、分光光度計測量方式

在一定的環(huán)境中應(yīng)用分光光度計*常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長下，測試每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。*后，將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測得吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對應(yīng)的濃度或含量。

五、分光光度計使用方法

1.使用分光光度計前，應(yīng)先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理。以及各個操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應(yīng)該對儀器的**性進行檢查，電源線接線應(yīng)牢固。通地要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源開關(guān)。并在使用前先檢查放大器暗盒的硅膠干燥筒(在儀器的左側(cè))，如受潮變色，應(yīng)更換干燥的藍色硅膠或者倒出原硅膠，烘干后再用。

2.將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔(放大倍率*小)。

3.開啟分光光度計電源，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，波長調(diào)至測試用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。

4.打開試樣室蓋(光門自動關(guān)閉)，調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透過率“****”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。

5.如顯示不到“100.0”，則可適當(dāng)增加微電流放大器的倍率檔數(shù)，但盡可能置低倍率檔使用，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。但改變倍率后必須按(4)重新校正“0”和“****”。

6.預(yù)熱后，按(4)連續(xù)幾次調(diào)整“0”和“****”，儀器即可進行測定工作。

7.吸光度A的測量按(4)調(diào)整儀器的“00.0”和“****”，將選擇開關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為“.000”，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。

8.濃度C的測量：選擇開關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路，即可讀出被測樣品的濃度值。

9.如果大幅度改變測試波長時，在調(diào)整“0”和“****”后稍等片刻，(因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時間)，當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“0”和“****”即可工作，吸收池(即比色杯)。
     

六、分光光度計使用注意事項

1.分光光度計在使用儀器前，必須仔細(xì)閱讀其使用說明書。

2.若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新調(diào)零及滿度后，再測量。

3.指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。

4.操作人員不應(yīng)輕易觸動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

5.分光光度計放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

七、分光光度計常見故障處理

1.樣品出峰位置不對

這是由于波長傳動機構(gòu)產(chǎn)生位移，應(yīng)檢查通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判斷波長是否**，對于**儀器而言處理手段相對簡單，使用儀器固有的自動校正功能即可;而對于相對簡單的儀器，這種調(diào)整則需要**人員來調(diào)修。

2.沒有任何檢測信號輸出

這是由于沒有任何光束照射到樣品室內(nèi)的原因應(yīng)將波長設(shè)定為530nm，狹縫盡量開到*寬檔位，在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，觀察白紙上有無綠光斑影像。檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位，雙光束儀器的切光電機是否轉(zhuǎn)動了(耳朵可以聽見電機轉(zhuǎn)動的聲音)。

3.樣品室內(nèi)無任何物品的情況下，全波長范圍內(nèi)基線噪聲大

這是由于光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品，應(yīng)觀察光源是否照射到入射狹縫的中央，石英窗上有無污染物。再重新調(diào)整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗。
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