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PCR儀的污染監(jiān)測
PCR儀是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。一個好的實驗室,要時刻注意污染的監(jiān)測,考慮有無污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。因此對于PCR儀的污染監(jiān)測也是日常工作中非常重要的一部分。
對照試驗:
1.陽性對照:在建立PCR反應(yīng)實驗室及一般的檢驗單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對照,它是PCR 反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標(biāo)志.陽性 對照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好,經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本,如以重組質(zhì)粒為陽 性對照,其含量宜低不宜高(100個拷貝以下).但陽性對照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽 性標(biāo)本,其對檢測或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大.因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn) 定,檢驗人員心中有數(shù)時,在以后的實驗中可免設(shè)陽性對照.
2.陰性對照:每次PCR實驗務(wù)必做陰性對照.它包括①標(biāo)本對照:被檢的標(biāo)本是血清就用 鑒定后的正常血清作對照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對照.②試劑 對照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以監(jiān)測試劑是否污染.
3.重復(fù)性試驗
4.選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增
PCR儀作為一種高精密度要求的儀器,在日常的一些小細(xì)節(jié)方面是十分注重要求的。對于PCR儀的污染監(jiān)測也會直接影響日后實驗的**性與**程度,因此不可以有任何的閃失?!?/span>PCR儀的污染監(jiān)測》一文由上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司整理,轉(zhuǎn)載聲明。