1實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminar flow)以紫外燈照射30-60 分鐘**，以70%ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)和技術(shù)參數(shù)

2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。

3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應(yīng)注意自身之**，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少 ClassII)。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒**品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2 鋼瓶之CO2  壓力

5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2  濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無(wú)菌水，每周更換)。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA)。

6. 水槽可添加**劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水
請(qǐng)問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在－20度？如果放在4度冰箱可以保存多久呢？是不是幾個(gè)小時(shí)就會(huì)失去活性？

平時(shí)放在-20度，分裝在50毫升螺口管，用時(shí)拿一管放4度用。

1. 認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一般不大會(huì)導(dǎo)致污染，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗，

2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清)，一般在4度盡量不要超過1個(gè)月，如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些，但*好也不要超過3-4個(gè)月，可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高，但我在過去的4年里一直是作原代細(xì)胞培養(yǎng)的，細(xì)胞嬌弱，經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過長(zhǎng)。

3. 關(guān)于實(shí)驗(yàn)用品的清洗與**，我的經(jīng)驗(yàn)是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上，然后加少許清洗劑，以超聲波洗滌30min左右，(如無(wú)超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈)，撈出晾干，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后，自來(lái)水清洗10-15遍，雙蒸水清洗3-4遍，晾干，高壓**后即可使用。

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